Diplomvortrag

Selektive Kulturverfahren und molekularer Nachweis von Clostridium botulinum in Honig und Fischerzeugnissen

Transcript

1. 1 Selektive Kulturverfahren und molekularer Nachweis von Clostridium botulinum in Honig und Fischerzeugnissen Matthias Mailänder matthias.mailaender@studium.uni-hamburg.de Diplomvortrag
2. 2 Clostridium botulinum Elektronenmikroskopie, Dennis Kunkel Lichtmikroskopie, Sporenfärbung mit Kristallviolett, U.S. Center for Desease Control Ermengem, E. Ueber einen neuen anaëroben Bacillus und seine Beziehungen zum Botulismus. Medical Microbiology and Immunology, 26, 1–56, 1897.
3. 3 Phänotyp Collins, East. Phylogeny and taxonomy of the food-borne pathogen Clostridium botulinum and its neurotoxins. Journal of Applied Microbiology, 84, 5–17, 1998. Gruppe: I II III IV Toxintyp: A, B, F B, E, F C, D G Proteolyse: Ja Nein Nein Ja Lipase: Ja Ja Ja Nein Wachstumsoptimum: 35–40°C 18–25°C 40°C 37°C
4. 4 Phylogenie Dessimoz, C., et.al OMA, A Comprehensive, Automated Project for the Identification of Orthologs from Complete Genome Data. Lecture Notes in Computer Science, 61–72, 2005. Gruppe II Gruppe II Gruppe I Gruppe I
5. 5 Botulinumtoxin Segelke, B., et.al: B. Crystal structure of Clostridium botulinum neurotoxin protease in a product-bound state: Evidence for noncanonical zinc protease activity. PNAS, 101, 6888–6893, 2004. PDB 3BON, ProteinShader
6. 6 Wirkort Wikimedia Commons: Diagramm einer ganzen Nervenzelle, Mariana Ruiz Villarreal, 2007, gemeinfrei Neuron
7. 7 Wirkort Wikimedia Commons: Diagramm einer ganzen Nervenzelle, Mariana Ruiz Villarreal, 2007, gemeinfrei Neuron
8. 8 Wirkort Wikimedia Commons: Diagramm einer ganzen Nervenzelle, Mariana Ruiz Villarreal, 2007, gemeinfrei Neuron Neuron
9. 9 Wirkmechanismus Simpson, L. L. Identification of the Major Steps in Botulinum Toxin Action. Annual Review of Pharmacology and Toxicology, 44, 167–193, 2004.
10. 10 Botulinumtoxin Ricin 2,3,7,8-Tetrachlordibenzodioxin Nicotin Kaliumcyanid LD50 (mg/70 kg) Toxizität beim Menschen Forth, Henschler, Rummel: Pharmakologie und Toxikologie (6. Auflage), B.I.W.-Verlag, Mannheim 1992, S. 749 10-6 10-4 10-2 1 10²
11. 11 Fallzahlen Deutschland Hélène Therre. Botulism in the European Union. Eurosurveillance, 4, 1–16, 1999. Robert-Koch-Institut. Infektionsepidemiologisches Jahrbuch. Berlin 2012. 1988 1989 1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 2001 2002 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 39 15 15 23 4 17 13 11 12 9 19 9 12 9 6 24 6 9 12 15 4 9 Jahr Fälle
12. 12 Therapie Bildquelle: Informationsdienst Wissenschaft, http://idw-online.de/de/image?id=53068, freie Verwendung Schmutzhard, E. Leitlinien für Diagnostik und Therapie in der Neurologie. Thieme, Stuttgart 2008, 4. Auflage.
13. 13 Risikolebensmittel Bundesinstitut für Risikobewertung: Hinweise für Verbraucher zum Botulismus durch Lebensmittel, Berlin, 2005
14. 14 Säuglingsbotulismus Robert-Koch-Institut. Säuglingsbotulismus: Fallbericht und Übersicht. Epidemiologisches Bulletin, 37, 1998.
15. 15 Wundbotulismus Postmes, T et al., Honey for wounds, ulcers, and skin graft preservation. Lancet. Vol. 341, no. 8847, pp. 256-257. 1993.
16. 16 Maustest nach § 64 LFGB ISO. Nachweis von Clostridium botulinum und Botulinum-Toxin in Fleisch und Fleischerzeugnissen L-06.00-26. In: Amtliche Sammlung von Untersuchungsverfahren nach Paragraph 64 LFGB Untersuchung von Lebensmitteln. Beuth-Verlag, Berlin 1988 positiver Nachweis
17. 17 ISO. Nachweis von Clostridium botulinum und Botulinum-Toxin in Fleisch und Fleischerzeugnissen L-06.00-26. In: Amtliche Sammlung von Untersuchungsverfahren nach Paragraph 64 LFGB Untersuchung von Lebensmitteln. Beuth-Verlag, Berlin 1988 10-1 10-2 10-3 Quantifizierung
18. 18 ISO. Nachweis von Clostridium botulinum und Botulinum-Toxin in Fleisch und Fleischerzeugnissen L-06.00-26. In: Amtliche Sammlung von Untersuchungsverfahren nach Paragraph 64 LFGB Untersuchung von Lebensmitteln. Beuth-Verlag, Berlin 1988 Anti-A Anti-B Anti-F Anti-E Toxintypisierung
19. 19 Multiplex-PCR Lindström, M. et.al. Multiplex PCR Assay for Detection and Identification of Clostridium botulinum Types A, B, E, and F in Food and Fecal Material. Applied and Environmental Microbiology, 67, 5694–5699, 2001. F B E A A F E B
20. 20 Selektivmedien AEY-Agar, ohne Hemmstoffe ISO-Methode, § 64 LFGB AEY-Agar mit 2 mg/L Nalidixinsäure und 10 mg/L Polymyxin-B-Sulfat Dezfulian, M., Dowell, V. R. Cultural and physiological characteristics and antimicrobial susceptibility of Clostridium botulinum isolates from foodborne and infant botulism cases. Journal of Clinical Microbiology, 11, 604–609, 1980.
21. 21 Vorgehensweise BLAST Weisburg, W. G., Barns, S. M., Pelletier, D. A., Lane, D. J. 16S ribosomal DNA amplification for phylogenetic study. J. Bacteriol., 173, 697–703, 1991.
22. 22 Phylogramm Saitou, N., Nei, M. The neighbor-joining method: a new method for reconstructing phylogenetic trees. Molecular Biology and Evolution, 4, 406–425, 1987.
23. 23 Zusammenfassung • Validierung und Optimierung der Multiplex-PCR nach Lindström et al. Untersuchungsgut Proben positiv Toxintyp Herkunft Honig 60 1 E Argentinien Fisch 30 1 E Travemünde • Neue Antibiotika-Kombinationen für Anreicherungsbouillon und Eigelb-Agar • 16S rDNS-Sequenzierung der Isolate
24. AUSBLICK > AUSBLICK > IN DIE ZUKUNFT IN DIE ZUKUNFT Mehta, J., Van, B., et. al The Use of Phages and Aptamers as Alternatives to Antibodies in Medical and Food Diagnostics. In: Biomedical Engineering, Trends, Research and Technologies, 2011. Scarlatos, A., et. al Methods for Detecting Botulinum Toxin with Applicability to Screening Foods Against Biological Terrorist Attacks. Journal of Food Science, 70, 121–130, 2005. Satterfield, B. A, et. al. A quadruplex real-time PCR assay for rapid detection and differentiation of the Clostridium botulinum toxin genes A, B, E and F. Journalof Medical Microbiology, 59, 55 –64, 2010.