Save 37% off PRO during our Black Friday Sale! »

Совершенствование прогнозирования органотоксичности лекарственных средств, элиминация которых определяется транспортерами органических анионов

Совершенствование прогнозирования органотоксичности лекарственных средств, элиминация которых определяется транспортерами органических анионов

НИР «Разработка методов определения и критериев оценки активности экспрессии генов-транспортеров лекарственных веществ» ОТЧЕТ по этапу № 3 «Совершенствование прогнозирования органотоксичности лекарственных средств, элиминация которых определяется транспортерами органических анионов»

213dacb7e1fa4f74ba845360c2e45c7c?s=128

ФГБУ «НЦЭСМП»

January 26, 2021
Tweet

Transcript

  1. ОТЧЕТ по этапу № 3 «Совершенствование прогнозирования органотоксичности лекарственных средств,

    элиминация которых определяется транспортерами органических анионов» НИР «Разработка методов определения и критериев оценки активности экспрессии генов- транспортеров лекарственных веществ» Прокофьев А.Б., директор ЦКФ. 21.12.2020 Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской федерации
  2. Цель: совершенствование подходов к определению и оценке экспрессии генов транспортеров

    ЛС. Задачи: 1. Сравнить уровень экспрессии генов транспортеров между клеточными линиями RPTEC/TERT1 и HEK293 2. Провести сравнительный анализ уровня экспрессии, функциональных характеристик ОАТ и цитотоксических эффектов бета-лактамных антибиотиков при транспорте ОАТ, в клеточных линиях НЕК293 и RPTEC/TERT1. 3. Разработать МР по оценке экспрессии генов-транспортеров органических анионов и ее взаимосвязи с потенциальными цитотоксическими эффектами. 4. Подача заявки на регистрацию интеллектуальной собственности: «Способ оценки транспорта отрицательно заряженных лекарственных средств на экспериментальной модели клеточной линии НЕК293». 5. Подача заявки на регистрацию компьютерной программы модуль «Транспортеры».
  3. Рекомендации регуляторных органов (клеточные культуры, рекомендованные для изучения транспортеров ЛС)

    *In Vitro Drug Interaction Studies —Cytochrome P450 Enzyme- and Transporter-Mediated Drug Interactions. Guidance for Industry ** Guideline on the investigation of drug interactions. European Medicines Agency, 2015. ***Guideline on drug interaction for drug development and appropriate provision of information. Pharmaceuticals and Medical Devices Agency. FDA* EMEA** PMDA*** НЕК293, MCDK, Caco-2, LLC- PK1 HEK293, CHO, MDCK, LLC-PK1 Caco-2, LLC-PK1
  4. Результаты (задача 1) 1. На градиентном амплификаторе «Biometra Tone 96G»

    был проведен опыт с подбором температуры отжига праймеров 2. Видно что для обоих праймеров температура отжига не должна превышать 63°С Cравнение уровня экспресcии генов транспортеров в ранних пассажах клеточных линий RPTEC/TERT1 и HEK293 показало примерно одинаковый уровень для обоих транспортеров, что можно объяснить недостаточным уровнем дифференцировки клеточной линии RPTEC/TERT1
  5. Результаты (задача 1) Уровень экспрессии генов транспортеров ОАТ1 и ОАТ3

    в клеточной линии RPTEC/TERT1 находится примерно на одном уровне с таковым в клеточной линии HEK293, что объясняется недостаточной дифференцировкой клеток RPTEC/TERT1. В более поздних пассажах предполагается увеличение уровня экспрессии ОАТ1 и ОАТ3.
  6. Результаты (задача 2) mRNA OAT1; Цефуроксим, 50μg/ml 1,27 1,22 0,95

    0,73 0,41 2,43 2,37 1,95 1,63 0,81 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 К 24ч 48ч 72ч 96ч Экспрессия мРНК ОАТ1 нормализованная по GAPDH HEK293 RPTEC/TERT1
  7. Результаты (задача 2) mRNA OAT3; Цефуроксим, 50μg/ml 2,84 2,74 2,18

    1,78 1,56 3,76 3,64 3,08 2,12 1,16 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 4 К 24ч 48ч 72ч 96ч Экспрессия мРНК ОАТ1 и ОАТ3, нормализованная по GAPDH HEK293 RPTEC/TERT1
  8. Результаты (задача 2) Влияние различных концентраций и времени воздействия цефуроксима

    активность каспаз 3/7 в клеточных линиях НЕК293 иRPTEC/TERT1 Концентрация цефуроксима 50мкг/мл 100мкг/мл 150мкг/мл Время инкубации 24ч 48ч 72ч 24ч 48ч 72ч 24ч 48ч 72ч Активность каспаз 3/7 НЕК293 - - - - + + + + + RPTEC/TERT1 - + + - + + + + +
  9. Результаты (задача 2) Влияние различных концентраций и времени воздействия цефепима

    активность каспаз 3/7 в клеточных линиях НЕК293 и RPTEC/TERT1 Концентрация цефепима 30мкг/мл 60мкг/мл 120мкг/мл Время инкубации 24ч 48ч 72ч 24ч 48ч 72ч 24ч 48ч 72ч Активность каспаз 3/7 HEK293 - - - + + + - + н.д. RPTEC/TERT1 - + + + + + + + +
  10. Результаты задача 2 1. Уровень экспрессии транспортеров ОАТ1 и ОАТ3

    в клеточной линии RPTEC превышает таковой в НЕК293 в 1,5 и 2 раза соответственно; при транспорте цефалоспоринов наблюдается понижение экспрессии генов транспортеров ОАТ1 и ОАТ3 в обоих клеточных культурах и повышение транспорта маркерного субстрата флуоресцеина в клеточной линии RPTEC. 2. Токсические эффекты, выражающиеся в активация каспаз 3/7 (маркеры апоптоза), в клеточной линии RPTEC при низких концентрациях цефалоспоринов возникают раньше (при 30 мкг/мл для цефепима и 50 мкг/мл для цефуроксима), чем в HEK293, что можно объяснить повышенной активностью ОАТ-транспортеров в RPTEC .
  11. Результаты исследований 4 квартала 2019 Цель: изучить возможные токсические эффекты

    β- лактамных антибиотиков группы карбапенемов на модели клеточной культуры HEK293. Задачи: - Провести анализ научной литературы о токсичности и методах ее изучения при воздействии ксенобиотиков. - Изучить токсические эффекты, возникающие при транспорте антибиотиков дорипенема и меропенема на модели клеточной линии HEK293.
  12. Заявка на интеллектуальную соб-ть: «Способ измерения экспрессии генов транспортеров органических

    анионов в качестве оценки функциональной характеристики клеточной линии для изучения транспорта ЛС» Дата поступления Входящий номер Регистр номер 08.12.2020 075056 2020140349 Краткое описание сущности РИД Изобретение относится к фармации, фармакологии и молекулярной биологии, а точнее к созданию экспериментальной модели для изучения сродства ЛС, преимущественно выводящихся через почки, к транспортерам органических анионов по измерению уровня экспрессии генов транспортеров органических анионов методом полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией (ОТ- ПЦР). Область применения РИД Фармация, фармакология и молекулярная биология. Способы измерения экспресии генов транспортеров лекарственных средств.
  13. Программа «Транспортеры» Заявление о Гос регистрации от 08.12.2020 Программа предназначена

    для электронного учета, хранения, обработки и анализа информации о лекарственных средствах, проявляющих в той или иной форме сродство к основным транспортерам органических анионов – ОАТ1 и ОАТ3. Область применения РИД Программа предназначена для использования экспертами ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России при проведении экспертизы лекарственных средств или в научной (научно-исследовательской) деятельности, направленной на получение и применение новых знаний о транспортерах лекарственных средств.
  14. Обобщенный обзор результатов НИР за 2020 год Новизна работы впервые

    разработана экспериментальная модель определения экспрессии генов транспортеров ЛС методом ОТ-ПЦР в клеточных линиях человека.
  15. Обобщенный обзор результатов НИР за 2020 год Обучающие лекции 1.

    Значение изучения транспортеров лекарственных средств в обеспечении эффективности и безопасности комбинированной фармакотерапии. 2. Роль ОАТ в развитии нефротоксичности и нефропротективности НПВС, в том числе при их применении в комбинации с субстратами ОАТ.
  16. Публикационная активность в 2020 году 1. Р.Е. Казаков, О.А. Чеча,

    И.А. Мазеркина, О.В. Муслимова, Е.Ю. Демченкова, Т.В. Александрова, В.А. Евтеев, С.А. Белков, А.Б. Прокофьев - Фармакогенетические подходы к повышению эффективности и безопасности применения статинов на примере аторвастатина. Безопасность и риск фармакотерапии 2020, Т. 8, № 1, С. 43-51 2. Е.А. Сокова, В.В. Архипов, И.А. Мазеркина, О.А. Муслимова - Некоторые аспекты оценки лекарственного поражения почек. Безопасность и риск фармакотерапии, 2020, Т. 8, № 3, С. 123-133 3. И.А. Мазеркина, В.А. Евтеев, А.Б. Прокофьев, О.А. Муслимова, Е.Ю. Демченкова.-β- лактамные антибиотики - межклеточное взаимодействие на уровне транспортеров органических анионов ОАТ1 и ОАТ3. Ведомости НЦЭСМП, 2020, Т.10, № 3, С. 177-183 4. В.А. Евтеев, И.С. Семенова, Н.Д. Бунятян, А.Б. Прокофьев.-Изучение экспрессии транспортеров органических анионов на модели клеточной линии RPTEC/TERT1. Биофармацевтический журнал, 2020, Т.12, № 5, С. 3-6
  17. None