ICH S2 遺伝毒性研究 3

ICH S2は遺伝毒性研究についてのガイドラインです。3では哺乳類でのin vivo試験についてまとめています。

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1. ICH S2 遺伝毒性研究 3 2020/10/29 Ver. 1.0
2. In vivo試験の推奨事項: 染色体異常検出 骨髄細胞の染色体異常・小核化で調べる • マウス・ラットの骨髄細胞を用いる • マウス末梢血赤血球・ラット網状赤血球を用いることもある • フローサイトメトリーなどはバリデートして用いる ＊赤血球は小核を調べるのに用いる。フローサイトメトリーは各細胞のDNA量を測定する方法
3. In vitro試験: その他の遺伝毒性試験 in vivo/vitro試験を検証するために追加試験を行うこともある • 細胞分裂が起こりにくい場合28日試験が必要 • 5つの試験法でDNA変異を計測する場合もある 1. 1細胞ゲル電気泳動（Comet Assay） 2. アルカリ抽出法 3. 遺伝子組み換えマウスでの遺伝子変異試験 4. DNA共有結合試験 5. 肝臓でのDNA合成の測定試験
4. 用量決定: 短期試験 1－3回投与では2000mg/kgを上限とする • 最大用量は1 mMまたは0.5 mg/mL • 耐性を示した場合は毒性から決定する • Comet Assayや変異試験から決定するときもある • 最小用量は最大容量の2－3ケタ低量になる
5. 用量決定: 多回投与試験 2つのオプションがある • Option 1 毒性試験の用量を用いる • Option 2 1. Maximum feasible Doseから決定する 2. 14日以上の試験なら1000mg/kgとする 3. 飽和にいたる用量 4. 急性投与量の半分 のどれか
6. 血球・骨髄毒性があるものについて 毒性を示す量の半分程度で実施する • 3－4日処理した時点での血液の試験 • in vitroでの哺乳類細胞での小核試験 • 急性用量での骨髄細胞小核試験 などの追加試験を行うことも有用
7. in vivoで陰性の場合 in vitroを実施しない/陽性の時には毒物動態の検証が必要 • 細胞毒性試験: 小核試験/肝臓での試験など • 暴露: 血中量・血漿中量、組織濃度 in vitroで陽性の時、以下のin vivo試験を検証する 他の投与経路・種・組織で検証することもできる
8. in vivo/vitroで陰性の場合 通常の吸収・分布・代謝・排出研究に結果は従う
9. in vivoでのサンプリング時間 OECD（1997）に従い実施する • 数週の試験で実施するときは、最終投与の次の日 • その他の場合は試験により適切に選ぶ 1. DNAダメージなら最終投与後2-6時間 2. 単回投与なら投与数時間後と24時間後
10. 使用する動物の数 OECDの推奨に従い実施する • 毒性試験に用いるすべての動物を対象にはしない • 毒性試験用検体からランダム抽出して実施する
11. オス/メスのげっ歯類の使用 性別特異的医薬品では、適切な性別を選択する • 急性投与では、性差がある場合両方を用いる • 普通はオスだけ使っていれば問題ない • 性差がなければ、結果は片方の性のものを用いる＊ ＊多回投与のとき
12. 投与経路 臨床での投与経路を用いる • 全身暴露を調べるときには変えてもよい ＊部分投与剤（皮膚剤など）での全身曝露について調べる場合を指す
13. 陽性対照の使用 すべての検査で準備しなくてよい • 定期的な実施を行う • 検査の信頼性が立証されてから準備する