日本薬局方－一般試験法 2.64 糖鎖試験法

日本薬局方－一般試験法 2.64 糖鎖試験法 2020/5/30 Ver. 1.0

糖鎖とは？糖タンパク質に結合している糖鎖を指す N-結合型とO-結合型がある • N-結合型 • O-結合型アスパラギンに結合するものセリン/トレオニンに結合するもの

糖鎖の役割タンパク質に結合した糖鎖は、 • 構造安定化 • 分解防止 • 生理活性の調節 • 細胞取り込み
• 免疫原性などに寄与する

糖鎖を測定する意味遺伝子組み換えタンパク質製剤の糖鎖は変化しうる • 糖鎖が有効性・安全性に影響を与えうる • 糖鎖の恒常性を確認する必要がある

糖鎖を構成する単糖種類は限られているが、構成はタンパクにより異なる • N-アセチルグルコサミン • N-アセチルガラクトサミン • ガラクトース • マンノース
• グルコース • フコース • N-アセチルノイラミン酸 • N-グリコリルノイラミン赤はアミノ糖、オレンジは中性糖、青はシアル酸

糖鎖の分析法大きく分けて4種類存在する • 単糖分析 • オリゴ糖分析 • 糖ペプチド分析 • グリコフォーム分析

単糖分析糖鎖を単糖に分解し、単行の種類と量を測定する方法 • 中性糖・アミノ糖は酸加水分解する • シアル酸＊は酵素分解・緩和な酸加水分解する • 単糖はHPLCなどで測定するシアル酸: 分解しやすい

オリゴ糖分析/糖鎖プロファイル法遊離の糖鎖として分析する方法のこと • 糖鎖のまま遊離させる • 糖鎖の遊離には酵素・ヒドラジン分解などを用いる • 遊離糖鎖はHPLC、キャピラリー電気泳動、MSで分析する

糖ペプチド分析糖修飾の部位・種類の特定に用いる • 糖タンパクを消化酵素で切断する • ペプチドと糖ペプチドをHPLC/MSで分析する

糖タンパクのグリコフォーム分析タンパク質のまま、糖鎖の特徴・恒常性を調べる方法 • 電気泳動・HPLCで分離し、プロファイルを得る • MSを用いることもある • 電気泳動はサイズ分離を行うもの＊が一般的＊クロマトグラフィー、キャピラリーゲル電気泳動、SDS-PAGEなど

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