日本薬局方－一般試験法 2.04 タンパク質のアミノ酸分析法

タンパク質はアミノ酸からできています。タンパク質に含まれるアミノ酸の分析方法についてまとめた項がこの試験法です。

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1. 日本薬局方－一般試験法 2.04 タンパク質のアミノ酸分析法 2020/5/1 Ver. 1.0
2. タンパク質のアミノ酸分析法とは？ タンパク質を構成するアミノ酸の種類と量を測定すること • タンパク質を加水分解し、アミノ酸を得る • アミノ酸をそれぞれ化学的に測定する
3. タンパク質の加水分解 タンパク質はアミノ酸同士がペプチド結合してできる ペプチド結合 ペプチド結合が加水分解されることでアミノ酸が得られる （右から左への反応） ＊R1、R2はアミノ酸の側鎖で、アミノ酸の種類により異なる
4. タンパク質とペプチドの加水分解 短いアミノ酸鎖をペプチドと呼ぶ • フェノール添加6 mol/L塩酸で110ºC・24時間処理する （アミノ酸の一部: トリプトファン、セリン、トレオニン、メチオニン、システインは化学変化する） たくさん方法はある • メルカプトエタンスルホン酸加水分解 • チオグリコール酸添加塩酸加水分解 • 過ギ酸酸化後にフェノール添加塩酸加水分解 • アジ化ナトリウム添加塩酸加水分解 • ジメチルスルホキシド添加塩酸加水分解 • 気相ピリジルエチル化後の塩酸加水分解 • 液相ピリジルエチル化後の塩酸加水分解 • 液相カルボキシメチル化後の塩酸加水分解 • ジチオジグリコール酸・ジチオジプロピオン酸反応後の塩 酸加水分解 • ビス(1,1-トリフルオロアセトキシ)ヨードベンゼンとの反応 後に塩酸加水分解 同定したいアミノ酸によって適切に使い分ける
5. アミノ酸の分析方法 イオン交換クロマトグラフィーでアミノ酸を分離する • アミノ酸は20種＋その誘導体だけ種類がある • 液体クロマトグラフィーの一種で分離する アミノ酸についてはWikipediaを参照 https://ja.wikipedia.org/wiki/%E3%82%A2%E3%83%9F%E3%83%8E%E9%85%B8
6. アミノ酸分析方法 分離後に定量、誘導体を作って分離する2つの方法がある • ニンヒドリン • o-フタルアルデヒド • フェニルイソチオシアネート • 6-アミノキノリル-N-ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート • (ジメチルアミノ)アゾベンゼンスルホニルクロリド • 9-フルオレニルメチルクロロギ酸 • 7-フルオロ-4-ニトロベンゾ-2-オキサ-1,3-ジアゾール 分離後にニンヒドリンで定量するのが最も一般的
7. ニンヒドリン反応 アミノ酸とニンヒドリンが反応し、青紫色の呈色を示す反応 ニンヒドリンの化学式はWikipediaより https://ja.wikipedia.org/wiki/%E3%83%8B%E3%83%B3%E3%83%92%E3%83%89%E3%83%AA%E3%83%B3 ニンヒドリン アミノ酸 + 2ニンヒドリン → ルーへマン紫＋CO 2 ＋3H 2 O＋CHO-R （Rはアミノ酸の側鎖）